Qu'est ce que la culture in vitro ?

   La mise en culture in vitro est le processus par lequel une ou plusieurs cellules sont placées hors de leur environnement naturel, et sont maintenues en vie dans un milieu nutritif stérile.

   Le terme "in vitro" vient du latin "vitro" signifiant verre ; en effet, les cellules transférées sont placées dans un milieu de verre stérile, par exemple une tube à essais, une éprouvette ou encore une boite de Pétri.

La culture in-vitro chez le végétal :

Prenons pour exemple le Saint Paulia et son protocole :

Matériel :

- Coupelle avec papier imbibé d'eau de javel

- 5 pots de rinçages

- 1 pot d'eau de javel

- 1 pot d'agent mouillant

- flacon de culture

- instruments stériles

- coton tige

- Bec bunsen

 

   Tout dabord il faut éviter toutes contaminations exterieures, c'est pourquoi il faut se laver les mains et manipuler toujours près du bec bunsen. On prend soin de désinfecter le plan de travail avec de l'eau de javel. Les instruments sont eux aussi strérilisés. Chaque encolure de flacon doit passer sous les flammes du bec bunsen ainsi que chaque instrument avant et après son utilisation  (pour assurer une désinfection optimale).

   On coupe ensuite une feuille de Saint Paulia, à la tige, que l'on rince à l'eau. Puis on place la feuille dans le pot d'agent mouillant, pendant 5 minutes (= 1goutte de liquide vaiselle et de l'eau). On se relave les mains, on place son masque, puis on recommence à se laver les mains avec de l'alcool. Il faut ensuite retirer la feuille à l'aide d'une pince, et la replacer 10 minutes dans un flacon d'eau de javel. La feuille de Saint Paulia est successivement placée dans 4 bains différents d'eau stérile durant 5 minutes. On agite la feuille de temps à autre.

   La mise en culture de l'explant commence à partir du dernier bain. On commence par mettre l'explant dans la boite de pétri, où l'on découpe, à l'aide d'un scapel stérile, deux carrés de 1 cm de coté. Ensuite, on ouvre le flacon, le bouchon est posé sur le papier imbibé d'eau de javel, on dépose à la surface du milieu nutritif l'explant (face inférieure sur le milieu). On utilise le coton tige imbibé d'eau de javel pour désinfecter le col du flacon que l'on referme enfin.

   Le flacon de culture est déposé dans une armoire de culture éclairée 16h/24h, à une température d'environ 22 °C.

   Après environ huit semaines, les cellules isolées passent par un stade de cal, (amas de cellules non différenciées et en division), où l'on observe des micro-feuilles. La spécialistation des cellules, ainsi que le cal, sont dus à plusieurs hormones qui, présentes sous différentes quantitées, permettent de déterminer la nature des organes en place. A la fin de cette étape, une nouvelle plante est créée, identique à la première.

   La technique de la culture in-vitro a donc pour but de regénérer les végétaux grâce au  principe de la totipotence cellulaire.

Culture de cellules isolées avec formation de micro-feuilles dans un flacon stérile

   Culture in vitro de cellules isolées avec formation de micro-feuilles dans un flacon stérile.

 

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